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PCR
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)

服務(wù)編碼

項(xiàng)目名稱

項(xiàng)目報(bào)價(jià)

項(xiàng)目周期

BT5001

細(xì)胞培養(yǎng)

2000元

1-2周

BT5002

細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

3000元

1-2周

BT5003

穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建

咨詢

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一、服務(wù)內(nèi)容

1、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株篩選

通過(guò)轉(zhuǎn)染試劑或電穿孔方式等方式,將目的基因?qū)胭N壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞24-48小時(shí)后,目的基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。此時(shí)為了建立穩(wěn)定細(xì)胞系,可根據(jù)不同基因載體中所含的抗性標(biāo)記,選用相應(yīng)的藥物對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選,從而得到穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞克隆。觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能(短時(shí)間即可進(jìn)行觀察,但效應(yīng)會(huì)很快丟失)。

2、針對(duì)不同種類細(xì)胞使用藥物,低氧,壓力等外源因素進(jìn)行刺激等處理,建立相關(guān)的細(xì)胞模型,從而進(jìn)行后續(xù)的研究工作。

二、樣品要求(樣品處理及保存見(jiàn)附件)

1干冰運(yùn)輸:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,消化后低速離心1000rpm5min收集細(xì)胞,加入適量配制好的凍存液后吹打均勻。將細(xì)胞分裝入凍存管中,標(biāo)明細(xì)胞的名稱、細(xì)胞代次、凍存時(shí)間及操作者;放4℃冰箱30min-2030min1h-80℃過(guò)液,然后放入液氮罐;細(xì)胞數(shù)目不少于5×106/ml

2常溫運(yùn)輸:細(xì)胞貼壁覆蓋瓶底面積達(dá)40%以上時(shí),裝滿培養(yǎng)液,瓶口用封口膜封好,裝入盒子,盒子里用泡沫或棉花塞滿,讓瓶子固定在盒子中。

三、服務(wù)特點(diǎn)

1、針對(duì)不同細(xì)胞系篩選合適的轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒濃度配比,提高轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)量

2、豐富的抗生素篩選經(jīng)驗(yàn)和單細(xì)胞克隆鑒定方法提高實(shí)驗(yàn)效率

3、構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株可穩(wěn)定傳代,極少發(fā)生性狀丟失

四、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)

服務(wù)項(xiàng)目

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)¥

實(shí)驗(yàn)周期

蛋白瞬時(shí)表達(dá)或敲低

基因表達(dá)或敲低載體構(gòu)建

請(qǐng)參見(jiàn)載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

載體轉(zhuǎn)染

3000/樣品

1

Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)或敲低

2000/目的蛋白/

2

蛋白穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建(混合克隆)

表達(dá)載體構(gòu)建

請(qǐng)參見(jiàn)載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

轉(zhuǎn)染和抗生素篩選

40000/細(xì)胞系

3-4

Western Blot檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞株蛋白表達(dá)

2000/目的蛋白/

2

蛋白穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建(單克隆)

表達(dá)載體構(gòu)建

請(qǐng)參見(jiàn)載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

轉(zhuǎn)染和抗生素篩選

50000/細(xì)胞系

6-8

Western Blot檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞株蛋白表達(dá)

2000/目的蛋白/

2

蛋白敲低細(xì)胞系構(gòu)建(單克隆)

shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建

請(qǐng)參見(jiàn)載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

轉(zhuǎn)染和抗生素篩選

60000/細(xì)胞系

6-8

Western Blot檢測(cè)敲低細(xì)胞株蛋白表達(dá)

2000/目的蛋白/

2

蛋白真核表達(dá)(分泌表達(dá))

分泌型表達(dá)載體的構(gòu)建

請(qǐng)參見(jiàn)載體構(gòu)建目錄

2-3

質(zhì)粒大提(含去內(nèi)毒素)

700/質(zhì)粒

1

細(xì)胞轉(zhuǎn)染

3000/質(zhì)粒

2

蛋白表達(dá)檢測(cè)(Western Blot ELISA

2000/目的蛋白/膜;600/

2

蛋白表達(dá)和純化

20000/mg

2

五、客戶提供材料

1、待克隆基因和載體信息,待敲低基因信息和shRNA序列信息(如無(wú)相關(guān)shRNA序列信息,本公司可代為設(shè)計(jì)并收取相關(guān)費(fèi)用);

2、待轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(如需使用常用腫瘤細(xì)胞株,如293/293THeLa等可由本公司提供);

3、陽(yáng)性對(duì)照樣品(盡量提供)

4、相關(guān)文獻(xiàn)(可選)

六、提交給客戶結(jié)果

1、構(gòu)建完成的載體和甘油菌株;

2完整測(cè)序報(bào)告和序列堿基圖

3、載體真核表達(dá)鑒定結(jié)果

4、載體真核表達(dá)蛋白

5、穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株>1×107

6、穩(wěn)定敲低細(xì)胞株>1×107

7、完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括基因擴(kuò)增圖,細(xì)胞株過(guò)表達(dá)和敲低檢測(cè)結(jié)果圖等)







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